Mionecroses clostridiais bovinas / Bovine clostridial myonecrosis

As mionecroses são enfermidades altamente fatais, representadas pelo carbúnculo sintomático e edema maligno. Com o objetivo de determinar a ocorrência dos diferentes clostrídios envolvidos nas mionecroses em bovinos no Brasil, foi realizado um estudo retrospectivo a partir de 30 casos suspeitos de carbúnculo sintomático e edema maligno. Empregou-se a técnica de estreptavidina biotina peroxidase em tecidos de bovinos fixados em formol e incluídos em parafina de arquivos de patologia de diferentes estados do país. Foram detectados 21 Clostridium chauvoei (70%), cincoClostridium septicum(17%), seguidos de doisC. chauvoeiassociado aoC. septicum (7%), um C. chauvoei mais Clostridium sordellii (3%) e um C. chauvoei mais Clostridium novyi tipo A (3%). Este é o primeiro diagnóstico de C. novyi tipo A no Brasil, e o primeiro relato da ocorrência de C. chauvoei associado à lesão no miocárdio. Os achados da maior ocorrência de C. chauvoei e C. septicum corroboram com estudos anteriores no país. Estes dados sobre a ocorrência dos agentes responsáveis pelas mionecroses em diferentes estados do país são de extrema importância frente às decisões relativas ao controle dessas enfermidades.

Clostridial myonecroses are highly fatal diseases, characterized by black leg and malignant oedema. In order to determine the occurrence of the different agents involved in Brazilian clostridial myonecrosis, a retrospective study was conducted concerning 30 suspected cases of blackleg and gas gangrene using a streptavidin-biotin peroxidase technique in formalin-fixed, paraffin-embedded tissues of cattle from the archives of pathology of different states of Brazil. The clostridia predominantly detected wereClostridium chauvoei(70%), followed by Clostridium septicum (5 cases or 17%), C. chauvoei plus C. septicum (2 cases or 7%), C. chauvoei plus Clostridium sordellii (1 case or 3%), C. chauvoei plus Clostridium novyi type A (1 case or 3%). This is the first diagnosis of C. novyi type A in Brazil. The findings of the higher occurrence of C. chauvoei and C. septicum concur with previous works in Brazil. This article also includes the first report in Brazil of the occurrence of C. chauvoei associated with a lesion in the myocardium. Thus, this study supplies important data about the occurrence of the agents responsible for clostridial myonecrosis in different states of Brazil, these data being important for decisions relative to control of these diseases.

Clinicopathologic features of experimental Clostridium perfringens type D enterotoxemia in cattle.

This study was designed to experimentally reproduce enterotoxemia by Clostridium perfringens type D in cattle and to characterize the clinicopathologic findings of this disease. Fourteen 9-month-old calves were inoculated intraduodenally according to the following schedule: group 1 (n = 4), C. perfringens type D whole culture; group 2 (n = 3), C. perfringens type D washed cells; group 3 (n = 5), C. perfringens type D filtered and concentrated supernatant; group 4 (n = 2), sterile, nontoxic culture medium. In addition, all animals received a 20% starch solution in the abomasum. Ten animals from groups 1 (4/4), 2 (3/3), and 3 (3/5) showed severe respiratory and neurologic signs. Gross findings were observed in these 10 animals and consisted of acute pulmonary edema, excessive protein-rich pericardial fluid, watery contents in the small intestine, and multifocal petechial hemorrhages on the jejunal mucosa. The brain of one animal of group 2 that survived for 8 days showed multifocal, bilateral, and symmetric encephalomalacia in the corpus striatum. The most striking histologic changes consisted of perivascular high protein edema in the brain, and alveolar and interstitial proteinaceous pulmonary edema. The animal that survived for 8 days and that had gross lesions in the corpus striatum showed histologically severe, focal necrosis of this area, cerebellar peduncles, and thalamus. Koch's postulates have been met and these results show that experimental enterotoxemia by C. perfringens type D in cattle has similar clinical and pathologic characteristics to the natural and experimental disease in sheep.

PCR multiplex para identificação de isolados de Clostridium chauvoei e Clostridium septicum / Multiplex PCR for identification of Clostridium chauvoei and Clostridium septicum

Padronizou-se uma técnica de reação em cadeia da polimerase múltipla (PCR multiplex) para detecção de Clostridium chauvoei e Clostridium septicum em culturas puras. Foram utilizados pares de iniciadores para segmentos específicos dos genes que codificam a flagelina de C. chauvoei e a toxina alfa de C. septicum. Para avaliaçã o da PCR multiplex, foram testados 16 isolados clínicos de C. chauvoei e 15 isolados de C. septicum provenientes de ruminantes, quatro sementes vacinais de cada um desses agentes. Amostras de referência de ambos os microrganismos foram usadas como controle. Para avaliar a especificidade, DNAs genômicos dos seguintes microrganismos foram usados: C. sordellii, C. novyi tipo A, C. novyi tipo B, C. perfringens tipo A, C. haemolyticum, C. botulinum tipo D, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Enterobacter aerogenes, Escherichia coli e Salmonella typhimurium. Todos os isolados e sementes vacinais de C. chauvoei e C. septicum foram detectados pela técnica. Não foram observadas reações cruzadas com as outras espécies de clostrídios, outras espécies bacterianas ou entre C. Chauvoei e C. septicum. As menores concentrações de DNA de C. chauvoei e C. septicum detectadas foram 45pg/µl e 30pg/µl, respectivamente. A PCR multiplex pode ser utilizada para a identificação específica de C. chauvoei e C. septicum em culturas puras.

Multiplex PCR was optimized to detect Clostridium chauvoei and Clostridium septicum in pure cultures. In each reaction, a pair of primers for a specific segment of the flagellin gene of C. chauvoei and a pair of primers for a specific segment of alpha toxin gene of C. septicum were employed. Reference strains of both microorganisms were used as control. The multiplex PCR was evaluated by testing 16 clinical isolates of C. chauvoei from ruminants, 15 clinical isolates of C. septicum from ruminants and, four vaccine strains of each one of these agents. Reference strains of both microorganisms were used as control. To evaluate the specificity, genomic DNA of the following microorganisms was used: C. sordellii, C. novyi type A, C. novyi type B, C. perfringens type A, C. haemolyticum, C. botulinum type D, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Enterobacter aerogenes, Escherichia coli, and Salmonella typhimurium. All the isolates and vaccine strains of C. chauvoei and C. septicum were positive by PCR assay and cross reactions were not observed with the other species of clostridia, the other bacterial species or amongst both investigated agents. The smallest concentrations of DNA detected from C. chauvoei and C. septicum were 45pg/µl and 30pg/µl, respectively. The multiplex PCR was useful for the specific identification of C. chauvoei and C. septicum in pure cultures.

Avaliação de vacinas contra Clostridium novyi tipo B / Evaluation of vaccines against Clostridium novyi type B

Avaliou-se a eficiência de 13 vacinas comerciais contra clostridioses que continham em sua composição Clostridium novyi tipo B, pela titulação de antitoxina alfa em soro de coelhos e de bovinos vacinados e pelo teste de desafio direto em cobaias. As vacinas codificadas como T1 e T10 apresentaram, em coelhos, títulos de antitoxina alfa de 8 e 12UI/ml respectivamente, superiores ao nível mínimo de teste de 3,5UI/ml, recomendado para controle desse produto, e as vacinas T2 e T5, títulos de 2 e 3UI/ml, respectivamente. As vacinas T1, T2, T5 e T10 apresentaram níveis de antitoxina alfa detectáveis em bovinos, mas somente T1 e T10 induziram títulos compatíveis com o nível de teste. Pelo método de desafio direto em cobaias, as vacinas T1, T2, T5, T10 e T11 atenderam aos requisitos, protegendo todos os animais desafiados. Em sua maioria, as vacinas comercializadas no Brasil contra Clostridium novyi tipo B foram ineficientes em estimular títulos sorológicos compatíveis com os níveis de teste recomendado para controle desse produto.

Production and purification of epsilon prototoxin produced by Clostridium perfringens type D

A prototoxina epsilon foi obtida a partir de cultivo líquido, rico em carboidratos, a partir de amostra de C. perfringens tipo D (INTA - Argentina), incubado em condiçöes de anarobiose à 37ºC por oito horas. O sobrenadante da cultura foi concentrado utilizando-se o sistema Amicon com membrana de "cut off" de 10 kDa. O concentrado foi precipitado com sulfato de amônio (350 g/ml) e dissolvido em tampäo fosfato 0,01 M (pH 7,2). A prototoxina purificada por cromatografia de troca iônica (DEAE-Sepharose CL 6B) e isolada no primeiro pico, mostrou uma banda única de aproximadamente 34kDa de peso molecular em SDS-PAGE, além de ser tóxica em camundongos

Avaliaçäo de vacinas contra Clostridium perfringens tipos C e D / Evaluation of vaccines against Clostridium perfringens type C and D

Determinou-se a eficiência de sete vacinas comerciais contra clostridioses, que continham toxóides de Clostridium perfringens tipos C e/ou D, pelo teste de soroneutralizaçäo em camundongos a partir do "pool" de soros de coelhos imunizados. Seis vacinas produzidas no Brasil foram ineficientes em estimular níveis sorológicos de beta e épsilon antitoxinas compatíveis com os níveis de teste recomendados para controle destes produtos. Uma vacina importada apresentou títulos de anticorpos séricos superiores aos níveis mínimos exigidos de 10 e 5UI/ml para as toxinas beta e épsilon, produzidas por C. perfringens tipos C e D, respectivamente. Como controle dos testes empregou-se um toxóide bivalente padräo. Quatro dos seis toxóides de origem nacional, quando testados em caprinos, näo apresentaram níveis de antitoxinas detectáveis com os níveis de testes de L+ e L+/10 para beta e épsilon toxinas, respectivamente

Surto de botulismo em bovinos alimentados com cama de frango no Brasil / An outbreak of botulism in cattle fed chicken litter in Brazil

An outbreak of botulism in bovines (Bos taurus) fed chicken litter in the State of Minas Gerais, Brazil, resulted in high mortality. High levels of the toxin of Clostridium botulinum type C was detected in the contents of intestines and liver of diseased catle as well as in the chicken litter used to feed these animals

Isoflurano em anestesia pediátrica / Isoflurano in pediatric anesthesia

Este trabalho foi desenvolvido para observar, registrar e analisar as vantagens e desvantagens do uso do isoflurano, em relaçäo ao halotano, em anéstesia pediátrica. Foram comparados dois grupos de 30 pacientes cada, obtidos por distribuiçäo aleatória na admissäo. Os dois grupos se mostraram análogos quanto a idade, peso e distribuiçäo por sexo. A medicaçäo pré-anestésica, a induçäo e a manutençäo foram padronizadas e semelhantes em ambos os grupos, variando apenas o anestésico inalatório - isoflurano ou halotano. A respiraçäo foi mantida sob controle manual ou mandatória intermitente. No pós-operatório imediato os pacientes permaneciam na sala de recuperaçäo para observaçäo de parâmetros cardiovasculares, respiratórios, temperatura e regressäo pós-anestésica. Na manutençäo da anestesia, a concentraçäo inspirada (FI) média de isoflurano foi de 1,57 ñ 0,30% (FI/CAM 1,3) e de halotano 1,45 ñ 0,37% (FI/CAM 1,3) e de halotano 1,45 ñ 0,37% (FI/CAM 1,9). Essa diferença no índice FI/CAM entre isoflurano e halotano foi estatisticamente significativa. Os pacientes do grupo isoflurano atingiram mais rapidamente os estagios I e IV de regressäo da anestesia, sendo estatisticamente significativa a diferença em relaçäo ao halotano, para o estágio I de regressäo. Ambos os grupos tiveram ligeira diminuiçäo das pressöes sistólica e diastólica, aumento da freqüência cardíaca estatisticamente significativa em relaçäo a visista pré-anestésica e ligeira diminuiçäo da temperatura no transoperatório. Ocorreram alg